本發明固定化金屬親和薄膜之製備方法包含步驟為：令一表面具有羥基之薄膜與一鹼液於一相轉移催化劑存在下進行反應，以取得一活化膜；在一兩性溶劑的存在下，令該活化膜與一環氧化物相反應，使該活化膜的表面具有多個環氧基；以及令該具有多個環氧基之活化膜與一含有螯合劑且pH值範圍介於10~14之間的水溶液相反應，進而製得一表面具有多個可螯合金屬離子的螯合基之固定化金屬親和薄膜。由上述之方法所製得之固定化金屬親和薄膜可螯合金屬離子的量是介於4.0~4.6 mmole/cm2之間。本發明還提供該親和薄膜螯合金屬離子後製得之金屬錯合膜；以及該金屬錯合膜固定酵素後所製得之固定化酵素膜。